：plko.1-trc克隆载体

财团的干扰

1的plko。克隆载体骨干，技术联盟（券）建了一个图书馆的发夹针对15000人和15000小鼠基因。addgene正与真相与和解委员会使这个状克隆载体提供给科学界。请举北陆等人。，2006月；124（6）：1283-98（医学）在所有出版物引起使用这种载体。

1 plko数码地图。

plko。1是一个不称职的慢病毒载体选择的真相与和解委员会表达发夹。plko。1可引入细胞通过直接转染，或可转换成慢粒子随后感染的靶细胞系。一经推出，嘌呤霉素抗性标记编码plko 1允许方便稳定的选择。

图1：图1 plko含有状插入。原plko.1-trc克隆载体有一1.9kb填充物是由消化上井和限制性。状核苷酸克隆到上井和限制性网站中的填充物。在上井现场销毁在大多数情况下（取决于靶序列），而限制性网站保存。一个完整的地图plko。1载1.9kb填塞，访问www.addgene.org/10878。

描述向量元素

U 6人U 6启动子驱动聚合酶转录三代状记录。

cppt中央polypurine道，cppt，改善传导效率，促进核进口的载体”的国家的复杂的细胞的转。

hpgk人力磷酸激酶启动子驱动表达嘌呤。

嘌呤霉素抗性基因选择是选择plko 1质粒在哺乳动物细胞中。

3 ＇＇ltr 3 ＇ ＇钝长末端重复。

F1山F1细菌复制的起源。

安培的氨苄青霉素抗性基因选择plko 1质粒在细菌细胞。

市局山市局细菌复制的起源。

5 ＇＇ltr 5 ＇长末端重复。

债转速反应元件。

图2：细节状插入。该U 6启动子指导核糖核酸转录聚合酶三状。状包含21个“意义”的基础是相同的目标基因，一个环包含一个xhoi限制的网站，和21的“反”的基础，是相辅相成的“意义”基地。状其次是polyt终止序列聚合酶三。

. 3的相关产品

以下质粒可从addgene建议使用与plko 1 trc-cloning向量。

质粒（addgene身份#）描述

plko。1 -真相与和解委员会的控制（10879）阴性对照载体插入发夹。

plko。1 -争夺状（1864）阴性对照载体炒状。

pspax2（12260）包装质粒生产病毒颗粒。

pmd2。克（12259）信封质粒生产病毒颗粒。

注：plko。1也可以用来与包装质粒和pcmv-dr8.2（addgene # 8455）和包膜质粒pcmv-vsvg（addgene # 8454）从罗伯特温伯格的实验室。更多信息，访问addgene ＇的哺乳动物干扰工具页。

其他几个实验室已经plko衍生载体，也可能是有用的实验。看到这些载体，访问addgene ＇的网站和搜索”plko”。

回到顶部

B .设计为1 plko状寡核苷酸。

B . 1确定*佳21滨海目标在你的基因

选择合适的21滨海目标基因的步是有效的基因沉默。方法选择目标的不断提高。以下是建议为目标的选择。

1。使用中的选择工具来确定一组得分的目标，你的基因。例如，怀特海生物医学研究所主办了一个基因选择程序，可以访问后，免费注册（网址：/ /侏罗。我。麻省理工学院。”/ bioc / sirnaext /）。如果你有机会，另一个很好的程序irnai，这是免费提供的公司mekentosj（网址：http : / / / www.mekentosj。irnai /）。

总结准则设计的siRNA与有效的基因沉默是包含在这里：

从25nt下游的起始密码子（球蛋白），搜索21nt序列匹配模式机管局（n19）。如果没有合适的匹配，搜索纳尔（*新）ynn，没有任何核苷酸，是嘌呤（一，克），并是一个嘧啶（丙，你）。

气相色谱法的内容应该是36-52 %。

3’端应具有较低的稳定性–至少一一或之间的位置- 19。

避免针对内含子。

避免的4个或多个核苷酸重复，尤其是因为重复polyt是终止信号的核糖核酸聚合酶三。

2。减少退化的目标基因，利用美国的高炉项目。选择序列，至少有3个核苷酸错配的所有基因无关。

addgene建议你选择多目标序列为每个基因。一些序列将乙

原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司