优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。
ELISA 的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将
叙述板式ELISA 各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA ，国外试剂均与
特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。
1 标本的采取和保存
可用作ELISA 测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如
尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如
血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分ELISA 检测均以血清为
标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借
助于抗凝剂，而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医
学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA 中血浆和血清可同等应用。
血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性
的物质，以HRP 为标记的ELISA 测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP ，也会产生假
阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA 中可使本底加深。
一般说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清
融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，
不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反
复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰
存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂。
2 试剂的准备
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA 中用的蒸馏水或去离子水，包
括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH 计测量较正。从冰箱中取出
的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱
保存。

3加样
在 ELISA 中一般有3 次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加
物加在LEISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生
交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA ）需用稀释的血
清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血
清标本，然后在微型震荡器上震荡1 分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时
可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。
4 保温
在 ELISA 中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完
成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育（incubation） ，有人称之为孵育，在
ELISA 中似不恰当。

原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司