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上海恒远分析慢病毒转染贴壁细胞实验方法

点击次数:6052   发布时间:2013/6/17 10:00:27

一、慢病毒转染贴壁细胞实验方法

 1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。

 2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。

 3、(对polybrene毒性敏感的细胞选作此步骤)4小时后加入2ml新鲜培养基以稀释polybrene。

 4、继续培养24小时,用新鲜培养基替换含有病毒的培养基。

 5、继续培养。如果慢病毒含有荧光蛋白,一般转染48小时后可见明显荧光表达,72小时后更加明显。如需FACS检测转染效率,可在转染后72-96小时进行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加药筛选,可以在转染3-4天后开始加药。

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