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人半胱氨酸蛋白酶抑制剂elisa试剂盒操作步骤：
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在 37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀
时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符
合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测 样品 100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板 加上盖或覆膜，37℃反应120 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A 工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加
上覆膜, 37℃反应 60 分钟。
3. 温育60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约400μl/每孔，甩干（也
可轻拍将孔内液体拍干）。
4. 每孔加检测溶液B 工作液（同检测A 工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应 60 分钟。
5. 温育60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5 次，每次浸泡 1-2 分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍
将孔内液体拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜 37℃避光显色（30 分钟内，此时肉眼可见标准品的前 3-4
孔有明显的梯度兰色，后3-4 孔梯度不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入
顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。 在加终止液后立即进行检测。
原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司
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