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ELISA最基本的操作原理您知道哪些?

点击次数：5011 发布时间：2016/9/6 10:23:40

本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。
常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。酶联免疫吸附试验：是酶免疫测定技术中应用*广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。
1、阻断ELISA ：
本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。
下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：
首先将100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干；然后加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干；接着加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干；*后加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液用ELISA检测仪测定OD值。
2、竞争ELISA：此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。
其基本程序为：抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干。加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液用ELISA检测仪测定OD值。
被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就减少，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合方法。此外试验中应用酶标抗原的量较多。