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酶联免疫试剂盒灵敏度对试验结果的影响

点击次数：5027 发布时间：2016/11/1 9:46:15

酶联免疫试剂盒敏度高是一大利益，而这本来也是和查看样本有些有关的，假设待测样本中政策蛋白的浓度对比高，则对灵敏度恳求相对小一些。假设待测样本中政策蛋白的浓度对比低，则有必要考虑灵敏度的疑问。
一般来说，试剂盒曲线上的*小浓度是对比精确的，低于这个值因为与曲线是个“S”型结构有关，所以结果是有过失的，是一种预算。再加上实验过失，所以达不到志向的效果。建议挑选试剂盒时，应当看曲线上*小的浓度值，而不是试剂盒上写的灵敏度。
那么酶联免疫试剂盒查看哪些规划呢？确诊试剂的查看规划以ng/ml计。而多见的科研试剂盒中的样本中的政策蛋白，规划可随样本的类型而改变。所以实验前应经过文献和预实验的办法判定样本是不是在所购的规划内，是很首要的进程。
酶联免疫试剂盒假设不在查看规划内，分两种情况对待：
A、假设样本中政策蛋白太低，需找相应灵敏度更高的试剂盒来查看或浓缩样本。
B、假设样本中政策蛋白太高，则需求进一步稀释后进行查看。
那么在ELISA法试验中如何提高灵敏度呢?具体的操作方法如下：
1、包被液稀释的抗原（4、8、16、32、64、128ng/ml），用移液器小心将抗原液100μl加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可产生气泡。每个浓度加4孔（4个复孔），对照孔4孔加入相同体积的包被液；其中两孔加入100μl样本。用保鲜膜包好酶标板，将酶标板放入底部垫有湿砂布的铝盒中，放入4℃中包被过夜。
2、洗涤：将酶标板孔中的包被液倾干净，并反扣在干净的吸水纸上拍干，加入洗涤液洗涤进行洗涤。采用浸泡式洗涤法，将洗涤液注满板孔，放置3min，间歇摇动，浸泡时间不随意缩短，吸干孔内洗涤液，也可甩去洗涤液，反扣在吸水纸上拍干。重复洗涤4次。
3、封闭：在酶标板孔的底部加入封闭液200μl，室温下封闭1h。
4、1h后将酶标板孔中的封闭液倾倒干净，并反扣在干净的吸水纸上拍干，然后每孔中加入一抗使用液100μl，注意将抗体液加在酶标板孔的底部，避免加在孔壁上部。用保鲜膜包好酶标板，将酶标板放入底部垫有湿砂布的铝盒中，并在铝盒中放一装有少量水的烧杯，在37℃温箱中放置2h。
5、2h后取出酶标板，倾倒干净酶标板孔中的一抗溶液，并反扣在干净的吸水纸上拍干。洗涤4次，洗涤方法同2。
6、在酶标板孔中加入梅标二抗1:4000倍稀释的溶液100μl，加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可产生气泡。用保鲜膜包好酶标板，将其放入底部垫有湿砂布的铝盒中，并在铝盒中放一装有少量水的烧杯，在37℃温箱中放置1h。
7、取出酶标板，倾倒干净孔中的二抗溶液，并反扣在干净的吸水纸上拍干，按2洗涤方法洗涤4次。
8、在酶标板每孔中加入底物A液50μl，底物B液50μl，反应15min～20min后，在每孔中加入反应中止液50μl，在中止反应后15min时在酶标仪上于450nm处测定OD值。