新的一年，上海恒远技术专员为
elisa试剂盒新手入门的使用技术报告做出一番整理，在这里分享给您，供参考。
ELISA试剂盒方法原理
一、双抗体夹心法测定抗原
1.将抗原免疫种动物获得的抗体吸附于固相表面;
2.加抗原，形成抗原-抗体复合物;
3.加抗原免疫第二种动物获得的抗体，形成抗体抗原抗体复合物;
4.加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体);
5.加底物。底物的降解量＝抗原量。
二、直接法测定抗原
1.将抗原吸附在载体表面；
2.加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物；
3.加底物。底物的降解量＝抗原量。
三、间接法测定抗体
1.将抗原吸附于固相载体表面；
2.加抗体, 形成抗原-抗体复合物；
3.加酶标抗体；
4加底物。 测定底物的降解量＝抗体量。
ELISA试剂盒操作注意
1. 使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
2.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
3.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
4.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
5.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
8.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
12.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
◎ELISA试剂盒质控分析
1.人员培训内容包括：①检验项目的基本原理(ELISA试剂盒原理)；②熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成，包被片段及其组成)；③熟悉检测
仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识；④某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
2.基本了解
① 1971年Engvall等人把免疫组化的EIA技术应用于临床检验发展为ELISA试剂盒技术。
② 特点：ELISA试剂盒在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"。
③ 酶标记免疫活性物质，进行信号放大；
④ 有二步温育反应二次洗涤过程；
⑤ 灵敏度特异性相对较高。
⑥ 局限性：只能检测到ng水平
⑦ 精密度差(批内CV15-20%)；
⑧ 线性范围窄(一个数量级)；
⑨ 存在"HD-HOOK"效应。
以上由上海恒远生化试剂有限公司技术人员整理，希望对做实验的朋友有所帮助，还需要了解更多详细内容请查看网站试剂盒说明书或来电咨询我们。
原创作者：上海恒远生物技术发展有限公司
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