1、蛋白酶 K:能水解消化蛋白质,特别是与 DNA 结合的组蛋白,在尿素和 SDS 中稳定。一般工作浓度是50-100uq/ml,推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl(pH7.5) 10mM CaCl2
2、SDS:十二烷基硫酸钠,溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS还能与蛋白质结合而沉淀。
3、IPTG:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于蓝白斑筛选及 IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等。IPTG 和乳糖的结构相似,所以它和乳糖一样,可以与乳糖操纵元的阻遏蛋自结合,使阻遇蛋白的空间构像变化,四聚体解聚成单体,失去与操纵子特异性结合的能力,从而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是,IPTG 不被 β半乳糖苷酶水解。常与 X-GAL 一起用于蓝白斑筛选。作用强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定。
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是 IPTG 的显色试剂,在IPTG 的催化下显蓝色。常跟 IPTG 一起用与蓝白斑筛选。
5、G418:一种抗生素,对几乎所有的细胞都有毒性,是稳定转染常用的选择试剂。当 neo 基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后,则能启动 neo 基因编码的序列转录为 mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的表达,使细胞获得抗性而能在含有G418 的选择性培养基中生长。G418 的这一选择特性,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
6、DMSO:二甲基亚砜。实验室常用于作液体层析溶剂,同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物。能溶于所有烷烃和烯烃。
7、曲拉通 X-100:TritonX-100,用的细胞裂解液成分,在保护蛋白活性方面有一定作用, 能力介于 NP40 和 SDS 之间,偏向于NP40。
8、NP-40:很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的 buffer 可以获得胞浆蛋白。
9、BSA:牛血清白蛋白, 主要起维持渗透压作用、PH 缓冲作用,载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。常用于蛋白定量中的内参和抗体稀释液。
10、甲酰胺:甲酰胺被用作凝胶电泳中 RNA 的稳定剂,也用于稳定毛细管电泳中的变性单股 DNA。
11、TEMED:四甲基乙二胺。促凝剂。在中性及碱性 pH 条件下,加入 TEMED 可加速凝胶聚合。
12、巯基乙醇:一种强还原剂。可还原蛋白二硫键,从而使蛋白保持溶解状态,有利于与 SDS 的结合。使蛋白解离成单个亚基。
13、甲叉双丙烯酰胺:N,N'-甲叉双丙烯酰胺,别名 MBA,又叫亚甲基双丙烯酰胺,次甲基双丙烯酰胺,N,N'-甲撑双丙烯酰胺。作交联剂与丙烯酰胺聚合而制备聚丙烯酰胺凝胶。
14、过硫酸铵:过硫酸铵(APS)的作用主要是提供自由基,然后在促凝剂 TEMED 的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。
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