干转移

trans-bot处装配

1。准备转移缓冲液。

2。电泳后的凝胶，平衡转移缓冲液。平衡有利于消除电泳缓冲盐和洗涤剂。所需的时间平衡是依赖于凝胶厚度。例如，15分钟为0.75毫米，SDS - PAGE凝胶。

3。切膜的层面的凝胶。湿膜慢慢滑动它在45°角度转移到缓冲区，让它浸泡15 - 30分钟。

4。切滤波器纸张尺寸的凝胶。两根粗过滤纸（或六片薄滤）凝胶需要为每个胶/膜三明治。完全饱和滤纸浸泡在转移缓冲液。

5。如果有一个以上的全尺寸的凝胶是在同一时间内传输，剪下一块透析膜与适当的分子量截止到层面的凝胶。完全湿透析膜转移缓冲液。

单位组装标准转移

（戴上手套，这一程序，以避免污染的膜。）

1。拆下安全盖和不锈钢阴极组件。

2。将预浸片过滤纸上的铂阳极。滚管或试管在滤纸表面（如擀面杖）排除所有的空气气泡。如果薄过滤纸使用，重复2张buffer-soaked过滤纸。

3。把湿印迹媒体顶部的过滤纸。推出所有气泡。

4。小心地将平衡凝胶上的转印膜，将凝胶膜的中心。转移是不完整的，如果任何一部分的凝胶印迹介质外。推出所有气泡。

5。把另一片预浸泡滤纸顶部的凝胶，仔细去除气泡之间的凝胶和过滤纸。如果细过滤纸使用，三片上方的凝胶，消除泡沫从每一层之间。

6。如果有一个以上的全尺寸的凝胶被转移，地方片预浸透析膜过滤器顶部的纸堆。重复步骤2。多达四个迷你凝胶可以转移的同时，把它们并排在阳极平台。

7。小心地将阴极到堆栈。出版社从事锁存器与导柱无干扰的过滤纸堆。

8。地方上的安全盖装置。插头插进电源。极性是正常转移到阳极阴极，即，红的红和黑的黑风口的电源供应器。

注意：不要反向极性。这将导致损坏的不锈钢阴极。

9。打开电源。转移迷你凝胶15 - 30分钟。在10月15日五大凝胶可以转移的30分钟到1个小时。在15 - 25诉不超过25伏与仪器。一个电流限制（3毫安/厘米~ 2大型凝胶；5.5毫安/厘米迷你凝胶）的建议，防止过度加热运行期间。在强大的领域发展这种装置，转移可能并不总是定量。一定量的蛋白质可能被转移通过膜上下过滤纸。（即恒流~ 15线2迷你凝胶）

10。下列转移，使电源关闭，并断开单元从电源供应器。删除安全罩和阴极组件。抛弃过滤纸（和透析膜，如果使用）。传输效率可以监测染色的凝胶与考马斯亮蓝R -蛋白质染色或酶标仪的银染试剂盒。另外，预分子量标准可以使用，或部分的膜可以染色，总蛋白胶体金，生物印迹总蛋白染色，或阴离子染料如氨基黑。zeta-probe膜可以染色的biotin-blot总蛋白染色。

十二烷基硫酸钠可能被添加到缓冲区1增加蛋白洗脱从凝胶：

48三甘氨酸，39毫米，1.3毫米（20%甲醇），十二烷基硫酸钠（0.0375%），9.2。

溶解5.82克和2.93克甘氨酸三，十二烷基硫酸钠和0.0375克或3.75毫升的10%十二烷基硫酸钠在ddh2o（加入200毫升甲醇）；调整体积为1升的稀ddh2o。

不添加酸或碱调整pH值。

托宾转移缓冲sds-proteins使用硝酸纤维素（甲醇）或zeta-probe膜（无甲醇）：

在25毫米，192毫米甘氨酸（20%甲醇），PH值8.3

溶解3.03克和14.4克甘氨酸三ddh2o（加入200毫升甲醇）；调整容积为1升的ddh2o。

不添加酸或碱调整pH值

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