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阅读次数:1610 发布时间:2012/9/10 9:01:42
昆虫有一个开放的循环系统,血液可以简单地通过一个切口在身体墙。*方便的,你应把一条腿让血滴到冷的玻璃烧杯。以获得的收益,这是必要的,排除血液注入缓冲进入体腔。实验过程是如下图所示。
搬迁后的血细胞,溴化钾添加到血形成44%个解决方案。这是分层与磷酸盐缓冲液(公共广播公司),并形成一个密度梯度离心。*终,所有的蛋白质上浮或下沉的区域对应的密度。有一个低密度脂蛋白,黄色漂浮高于non-lipoproteins,包括绿色cyanoprotein。分离蛋白是分离。对个人的分数,密度是由折射率,蛋白质含量和组成的Brad ford法和电泳,分别,和脂质成分可以分析薄层和气相色谱法。
实验议定书
•1天出血和离心。
•2天分馏,折射率和透析。
•3天冻干。
1天:出血和离心。
注意:你需要戴上手套,整个程序。
每一组需要10 - 15蝗虫。
1。以2 - 5毫升的公共电视网在一个干净的100毫升烧杯和添加25µ升200毫米磺酰氟
注意安全。剧毒的!
2。流血的蝗虫持有所有的腿和翅膀断一条腿靠近胸部(见图片)。确保没有昆虫的唾液淌进烧杯(已经准备好纸巾擦口水)。
3。轻轻注入几百微升了通过部分皮下。
不要伤害肠道!。
4。冲洗血(黄因胡萝卜素)仔细进行挤压胸腔部位轻轻。收集血液从10 - 12蝗虫。
5。把流血蝗虫在罐子里。当他完成了出血,movet罐子的电冰箱。处理过的动物尸体在稍后的日期。
6。使血解决~ 15毫升与公共电视网。
7。添加8.9克溴化钾晶体,轻轻地搅拌,用干净的搅拌棒。
8。溶解部分转移到50毫升量筒和添加更多(2 - 3毫升)公共广播溶解溴化钾和搅拌至溶解。游泳池这些解决方案,高达20毫升的搅拌进一步在测量筒。
9。转移到30毫升塑料注射器(由夹子)连接到18针针和毛细管(见图片)。
10。让血流进热密封的离心管。
11。另加20毫升的注射器进入覆盖的血。
12。又热封口温暖起来。
13。平衡样本来自其他组;你必须精确!用分析天平、添加或删除公共电视网或从管。如果液体是在脖子上,去除尖端组织。
14。将金属帽的管,和密封的热封口机。一旦上限达到管的肩膀,快速移动的权利和推管盖与散热片。
15。将四管积分50转子的相对位置和地点,在超速离心机转子。
16。确保盖关闭。打开真空离心机。设置运行的条件10℃,刹车,45000,时间4.5 h。
17。旋转45000转为4.5小时,和留样一夜之间在离心机的。
2天:检索样本
(约2 - 3小时连续)
1。运行后结束,把真空,等到室压力达到大气压力。现在您可以删除管。
2。注意任何不寻常的观察期间或之后,法离心(例如,泄漏),并记录在离心机的书。清洁室和转子,并开始排练避免凝结在离心机。
3。用一把锋利的单刃剃刀仔细剪开离心管。
4。建立biorad馏分收集器。内容为20毫升的组分分馏。
5。确定密度使用折射计。
6。同时测定紫外吸光度在280纳米。记得使用uv-permeable塑料试管(1对)。
7。而确定的折射率发生2件透析管(每个约20厘米长)到500毫升的烧杯中充满了区水。
8。离开一个整除(300µ升)每一部分标记修改离心管透析。
9。透析对~ 1升区水在寒冷的房间,改变缓冲区的一次。
10。小心将整体携脂组分(通常是3 - 5黄色分数)进入透析管(关闭了在底部有一个橙色钳)使用巴斯德吸管。
11。关闭透析管,确保留下足够的扩展空间,在透析。
12。透析对4升区水在寒冷房间里过夜。改变水和重复拨号
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