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阅读次数：1504 发布时间：2012/9/17 9:38:09
一. 液体培养法 1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时 2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合，静置15分钟使其感染。 3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中，于适当温度下振荡培养约8~24小时，培养时间依噬菌体之不同而异。 4. 将培养液移入离心管中，以10,000 rpm （5,000 g）离心10分钟，以沉淀寄主细菌。 5. 将上清液移至新管中，以0.22μm孔径之过滤器（filter）去除残余菌体，即得不含寄主细菌之噬菌体原液。但因噬菌体原液呈透明状，无法以肉眼直接判断其增殖效果，故应测定其效价以确认增殖培养之成效。 二. 双层琼脂培养法 1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时。 2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合，静置15分钟使其感染。 3. 将混合液加入5 ml 冷却至45℃的0.7﹪琼脂培养基中，均匀混合后立即平铺在已倒好的1.8﹪琼脂培养基平板上。 4. 待平板凝固后移至适当温度之培养箱中，一般培养8~24小时，培养时间依噬菌体之不同而异。 5. 以上述相同之步骤制作另一不含噬菌体之对照组。 6. 将培养好的平板与对照组比较其澄清度，一般含噬菌体之平板呈澄清状，而仅含寄主细菌之对照组则呈混浊状。 7. 将含有噬菌体之平板置于 -20℃下4~5小时后，取出置于室温下解冻。 8. 将解冻后产生的液体移入离心管中，以10,000 rpm （5,000 g）离心10分钟以沉淀寄主细菌。 9. 将上清液移至新管中，以0.22 μm孔径之过滤器（filter）去除残余菌体，即得不含寄主细菌之噬菌体原液。 三. 表面琼脂培养法 1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养，一般培养16~24小时。 2. 将寄主细菌悬浮液3 ml均匀平铺于1.8﹪琼脂培养基平板上，静置2小时。 3. 将余的寄主细菌悬浮液吸出，再将噬菌体原液0.3 ml均匀涂抹于平板上。 4. 于适当温度下培养约16~24小时，培养时间依噬菌体之不同而异。 5. 取5 ml 新鲜液体培养基加入平板中，以 L 形玻棒刮洗下平板表面之菌体。 6. 将刮洗下之液体移入离心管中，以10,000 rpm （5,000 g）离心10分钟以沉淀寄主细菌。 7. 将上清液移至新管中，以0.22 μm孔径之过滤器（filter）去除残余菌体，即得不含寄主细菌之噬菌体原液。
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