脱氧核糖核酸的房屋设施的“实时”或聚合酶链反应动力学仪，美国应用生物系统模型7700序列检测系统（荧光定量仪）。聚合酶链反应（聚合酶链反应）发生了革命性变化的检测脱氧核糖核酸和核糖核酸。少为单拷贝一个特定序列可以具体扩增和检测。理论上，有一个定量关系的起始靶序列和数量的产品在任何给定周期。在实践中，虽然，这是一个共同的经验复制反应产生不同数量的产品。发展实时定量聚合酶链反应消除了变异与传统的定量聚合酶链反应，从而使常规和可靠的定量聚合酶链反应产品。该仪器，因此，现在提供了调查的能力以执行非常灵敏，准确，重现性测量基因表达水平。此外，该仪器可用于其他应用如病毒载量检测，进行等位基因歧视研究，优化反应条件。

答：实时聚合酶链反应化学

实时系统的反应是提高探针为基础的，而不是嵌入，产物的检测。主要缺点嵌入的检测扩增产物积累是具体的和非特异性产物产生信号。另一种方法，5 ＇核酸检测，提供了一个实时检测方法特异扩增产物。在放大过程中，退火的探针的靶序列，生成一个基板切割的5’核酸酶活性脱氧核糖核酸酶酶时，从上游引物延伸到该地区的探针。这依赖于聚合确保裂解探头只发生如果目标序列的扩增。

发展的荧光探针，使得有可能消除后的聚合酶链反应分析处理探针降解。该探测器是一个寡核苷酸与记者荧光染料和染料附着剂。虽然探头是完整的，靠近止渴大大减少所发出的荧光染料记者的örster共振能量转移（共振）通过空间。探针的设计与合成已简化的发现，适当的淬火观察为探针，记者在5 ＇端和淬火在3 ＇端。

图1图所发生的荧光探针在延长阶段的反应。如果靶序列，探针退火下游从一个入门网站，切割的5’核酸酶活性的脱氧核糖核酸酶作为引物延伸。该裂解探头分开的记者染料止渴染料，增加染料记者信号。卵裂消除探针从目标链，使引物延伸继续结束的模板链。因此，列入探头不抑制整个反应过程。额外的记者染料分子被裂解从各自的探针每个周期的影响，增加了荧光强度成正比的扩增生产。

利用荧光探针在核酸结合染料，具体杂交探针和目标的要求产生的荧光信号。因此，荧光探针，特异性扩增由于mis-priming或引物二聚体工件不会产生信号。另一个优点是它们可以是荧光探针标记不同，区别记者染料。通过使用探针标记不同的记者，扩增不同的序列，可以发现在一个单一的反应。缺点是不同的荧光探针，探针必须综合检测不同序列。

回到顶部

B .仪器仪表

踝臂指数棱镜7700序列检测系统是一个灵活的系统设计，充分利用的好处，荧光探针检测。7700个系统有一个内置的thermalcycler和直接激光通过光纤电缆的96个样本的威尔斯。荧光发射流经电缆摄像仪。因为每个照射顺序，尺寸的阵列可用于光谱分辨率的荧光灯。因为这7700种仪器检测整个荧光光谱，该系统能够识别和量化每个样品以及多荧光。该软件分析数据，首先计算贡献的每个组成部分染料的实验谱。每一个记者的信号，然后除以荧光内部参考染料（火箭）为规范non-pcr相关荧光波动发生交叉或时间。使用这种内部参考染料，启用的能力来区分流感